“ACCEPTED" 科研人耳中最動聽的詞！在科研的征途中，科研想法和得力的研究工具是基石，然而，投稿前后的精心準(zhǔn)備、也會成為“加速" 文章發(fā)表的金鑰匙！核心期刊的投稿指南和要求隨著期刊雜志對Western Blot數(shù)據(jù)的要求日益嚴(yán)格，除了常規(guī)的圖片質(zhì)量和分辨率要求，越來越多的審稿人和編輯要求提供完整的實驗細(xì)節(jié)和整膜數(shù)據(jù)等。在投稿之前，務(wù)必仔細(xì)閱讀期刊的投稿指南和要求，并按要求準(zhǔn)備好圖片和相關(guān)材料，以降低被退回或拒稿的風(fēng)險。以下是Nature、Cell和JBC這些核心期刊的具體要求，供參考。01 Nature?  強烈反對在不同凝膠/印跡膜之間進行樣品的定量比較；若不可避免，圖例中必須清晰標(biāo)注這些樣品來源于同一實驗或平行實驗，并且凝膠/印跡膜是平行處理的；?  對于凝膠中非相鄰泳道的重新排列，必須清晰的標(biāo)記泳道之間的邊界，并在圖例中詳細(xì)說明；? 必須確保內(nèi)參對照(e.g. GAPDH、actin)和目的蛋白在同一張印跡膜上進行。若樣品處理對照在不同的凝膠上電泳，必須在圖例中進行標(biāo)注。論文中裁剪的凝膠必須保留所有重要條帶；? 避免使用高對比度的凝膠/印跡圖，因為過曝可能會掩蓋其它條帶；? 作者應(yīng)該仔細(xì)檢查其手稿是否包含以下內(nèi)容：i. 檢查圖表是否有重復(fù)；ii. 檢查凝膠和印跡膜的泳道拼接情況；iii. 明確樣品處理對照和內(nèi)參對照；iv. 確保提供的原始掃描圖與圖表對應(yīng)。02 Cell盡量減少數(shù)據(jù)采集后的處理，如果確實需要從凝膠/印跡圖中刪除泳道或以任何形式整合數(shù)據(jù)，必須清晰的說明這些修改。03 JBCJournal of Biological Chemistry?  JBC要求投稿人在實驗方法部分描述所使用抗體的來源、種屬信息，包括目錄號和批次號。還需要提供數(shù)據(jù)證明所有抗體的特異性。如果使用了新型抗體，作者需要描述抗體的制備過程，包括抗原/表位的制備和純化，并提供驗證抗體特異性的數(shù)據(jù)等；?  不建議對Western Blot結(jié)果圖進行拼接處理，如確實需要從原始印跡圖中剪切展示，應(yīng)在圖例中清楚的標(biāo)注并解釋。嚴(yán)禁將不同印跡圖的條帶拼接在一起；?  避免對Western Blot結(jié)果圖過度裁剪，保留周邊適當(dāng)背景，特別是圖中應(yīng)完整呈現(xiàn)至少一條(理想狀態(tài)下多條)位于目的蛋白條帶上下方的marker；?  JBC強烈建議作者描述其信號強度定量的方法、如何建立信號強度與抗原載量之間的線性關(guān)系及如何在各泳道間校正蛋白上樣量。JBC推薦使用考馬斯亮藍、麗春紅等蛋白染色試劑對膜進行染色，將信號強度歸一化為總蛋白。同時JBC鄭重指出，不應(yīng)使用管家基因作為歸一化標(biāo)準(zhǔn)，除非能明確證明實驗處理未對管家蛋白的表達產(chǎn)生影響；?  作者應(yīng)準(zhǔn)備好在審稿時向?qū)徃迦颂峁┰嫉腤estern Blot數(shù)據(jù)、試劑驗證和定量分析。JBC也保留對所有圖像進行數(shù)字分析的權(quán)利。解讀投稿圖片的要求越來越多的機構(gòu)及期刊注重WB的原始數(shù)據(jù)，比如SCI期刊JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY (J CELL BIOCHEM) 在“作者須知"里提到“從2020年7月后都必須提供WB等的原始gel/blots圖片，且保證重復(fù)率，若發(fā)現(xiàn)有人為修改的地方一律予以拒稿。"接下來讓我們一起解讀J CELL BIOCHEM對WB圖片的要求。來自J CELL BIOCHEM在圖像處理和展示方面重要的原則是最大限度地保持完整的原始免疫印跡。投稿時應(yīng)向?qū)徃迦撕途庉嬏峁┪醇舨玫挠≯E全掃描圖或照片作為補充文件。如下圖a展示了一個條帶過度飽和的例子，這可能掩蓋或至少減弱了樣本間的差異。無論是否有統(tǒng)計學(xué)意義，不同條帶之間的比較和所加的對照應(yīng)放在同一張膜上。不同膜的印跡結(jié)果不可以直接合并到一張圖中。如果在一張圖中并排了非相鄰泳道的印跡膜條帶，它們之間應(yīng)有清晰可見的間隔(如下圖b紅色虛線框所示)。（圖片來源：A brief guide to good practices in pharmacological experiments: Western blotting - PMC (nih.gov)）如有些泳道包含了與研究主題不相關(guān)的數(shù)據(jù)，可從印跡膜中剪去，保留相關(guān)的數(shù)據(jù)(如圖c所示)。但據(jù)期刊要求，仍需向?qū)徃迦嘶蚓庉嬏峁┩暾≯E膜的數(shù)據(jù)(如圖d所示)。在所有的印跡圖像上都應(yīng)顯示或標(biāo)記Marker的分子量位置。如印跡已被水平裁剪，則至少應(yīng)顯示兩個相鄰的Marker條帶的位置(即，在條帶的上方和下方，如圖c所示)。