一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

CHO 細(xì)胞高表達(dá)位點(diǎn)基因定點(diǎn)敲入試劑盒（產(chǎn)品號(hào)：KRK-01101-K）是一款用于CHO細(xì)胞蛋白表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建的試劑盒。其原理為使用 CRISPR/Cas9 介導(dǎo)的基因定點(diǎn)整合技術(shù)，將外源基因定點(diǎn)插入到 CHO 細(xì)胞的潛在的轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)，提高外源基因的高效、穩(wěn)定表達(dá)。 

二、產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 定點(diǎn)整合，表達(dá)更穩(wěn)定

基于 CRISPR/Cas9 定點(diǎn)敲入技術(shù)，將目的基因精準(zhǔn)整合至CHO 細(xì)胞高轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)域，避免隨機(jī)整合造成的表達(dá)波動(dòng)，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定高表達(dá)。

2. 雙質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)，流程簡(jiǎn)化

采用雙質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染策略，無需復(fù)雜病毒包裝或多輪載體構(gòu)建，僅通過電轉(zhuǎn)即可完成基因?qū)耄?/span>進(jìn)行藥篩獲得細(xì)胞群，就可以直接進(jìn)行單克隆細(xì)胞鋪板。大幅降低實(shí)驗(yàn)門檻。

3. 周期顯著縮短

最快約6周獲得單克隆細(xì)胞株，整體開發(fā)周期縮短至 1.5–2.5個(gè)月，相比傳統(tǒng)隨機(jī)篩選節(jié)省大量時(shí)間。

4. 無GFP設(shè)計(jì)，更貼近工業(yè)開發(fā)場(chǎng)景

去除熒光篩選模塊，避免外源報(bào)告基因?qū)罄m(xù)表達(dá)穩(wěn)定性及下游開發(fā)造成干擾，更適合抗體/重組蛋白生產(chǎn)工藝開發(fā)。

5. 蛋白活性保持完整

定點(diǎn)整合后的目的蛋白具備正常構(gòu)象和生物學(xué)活性，可直接用于功能驗(yàn)證與候選分子篩選。

6. 配套檢測(cè)體系完整

內(nèi)置左右同源臂PCR引物，可快速完成單克隆陽性鑒定，提高篩選效率。

三、轉(zhuǎn)染效率

1. 化轉(zhuǎn)效率

2. 電轉(zhuǎn)效率

四、表達(dá)蛋白水平和蛋白活性

1. 細(xì)胞群表達(dá)水平示例

2. 單克隆表達(dá)水平示例

3. 單克隆細(xì)胞進(jìn)行基因敲入鑒定（以CD28-FC-GFP定點(diǎn)敲入CHO-S細(xì)胞克隆為例）

4. 表達(dá)蛋白活性展示（以CD28抗體激活擴(kuò)增T細(xì)胞為例）

五、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

CHO定點(diǎn)敲入試劑盒提供了一種快速構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的方法，縮短株構(gòu)建時(shí)間、降低篩選工作量、可快速進(jìn)入表達(dá)驗(yàn)證階段，且降低隨機(jī)整合位置效應(yīng)，批次穩(wěn)定性強(qiáng)，提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性、便于后續(xù)放大培養(yǎng)和工藝遷移；廣泛適用于單抗表達(dá)細(xì)胞株開發(fā)、重組蛋白穩(wěn)定表達(dá)、細(xì)胞株平臺(tái)構(gòu)建、工業(yè)級(jí)CHO宿主開發(fā)等領(lǐng)域。